无菌医疗器械初包装的洁净度可以从以下几个方面进行评价：微粒污染物，微生物负载和细菌内毒素。微粒污染可导致医疗器械不良事件的产生，上期内容小编已为您介绍无菌医疗器械初包装微粒污染的来源及测定方法，本期小编即为您介绍无菌医疗器械初包装微生物负载相关内容。

医疗器械的生产过程中，包装会经过多次传递，且涉及到多个工艺流程点，每一次的传递和每一个工艺流程点都可能带来污染。为加强对医疗器械的监管力度，国家药品监督管理局于2015年7月17日发布了《医疗器械生产质量管理规范附录无菌医疗器械》的公告（2015年第101号），其中对医疗器械产品初包装的生产环境做出了特殊的要求，“无菌医疗器械生产须满足其质量和预期用途的要求，最大限度地降低污染，并应当根据产品特性、生产工艺和设备等因素，确定无菌医疗器械洁净室（区）的洁净度级别，以保证医疗器械不受污染或能有效排除污染”。。然而，即使是依照产品质量系统的要求，在标准制造状态下生产的产品，也可能会有少量的微生物污染。这种情况下，只有灭菌才能消除微生物污染，将产品以无菌形式提供。许多产品的灭菌参数都是依据其生物负载数据的情况来确定的。生物负载的监控在产品的质量控制过程中发挥了极其重要的作用，如若忽视对生物负载的控制，不但会影响灭菌参数的设定，还可能对产品的灭菌质量造成重大影响。此外，生物负载还可用于许多方面的监测，例如：制造过程控制的常规监测、原材料、部件或者包装的监测、清洗过程效率的评估、总体的环境监测方案等。企业可以根据自身的实际情况，在不同生产环节，设定不同的生物负载监控点，不仅可以对目前各个生产环节和成品的质量控制情况进行监测，便于查找问题原因，还可以积累大量数据，指导后续的质量控制工作。

GB/T 19973.1-1-2015规定了生物负载测定应满足的要求，并提供了指南。下面小编既为您介绍其中的要点。

术语及定义

• 生物负载：一件产品和/包装上或其中存活的微生物总数。
• 回收率：用某一特定技术从产品上采集和/或培养微生物能力的测量。
• 样品份额：被测试的医疗器械规定部分。

产品选择的基本原则

• 选择和处理用于生物负载测定的产品的过程，应能确保所选产品对包括包装材料和过程的常规生产具有代表性。
• 若为生物负载测定的目的对产品进行分类，应记录每一分类内包含这一产品的理由。理由应包含所选产品在整个分类里具有代表性的标准。
• 由于生物负载测定易受时间推移的影响而改变，应考虑生物负载测定的取样时限。（部分液体产品可能存在支持微生物生长的现象）

 SIP取样的基本要求

• 如果已验证生物负载在本产品上或本产品内是均匀分布的，则 SIP可以是该产品的任何部分。
• 否则，样品应包含能代表所制产品的每种相应材质而随机选取的产品部位。
• 若已知生物负载分布，可以从认为对灭菌工艺最有严峻挑战的产品部分选择 SIP。

生物负载的测定

• 微生物采集

采用合适的采集技术采集微生物。

• 微生物培养（平板计数法）

非选择性需氧菌及厌氧细菌培养：取产品洗脱液接种于平板上，再注入TSA培养基，30-  35℃培养3-7天（厌氧细菌需要在厌氧条件下培养）。

酵母菌和霉菌培养：取产品洗脱液接种于平板上，再注入SDA培养基，20-35℃培养5-7天。

• 微生物计数

产品上的生物负载无法通过肉眼直接计数，因此需要将微生物洗脱后，对洗脱液中的微生物培养后进行计数，以评估产品上的微生物数量。可以采用膜过滤法和平板倾注技术进行计数。需要注意的是，即再优良的洗脱方法也无法保证将产品上的所有微生物全部洗脱，因此我们需要对洗脱方法的回收率进行评估，进而计算校正因子，不使用校正因子可能导致生物负载低估。回收菌落数与校正因子的乘积，即为测得的生物负载。

生物负载的微生物鉴定

• 当使用生物负载这一数据时（例如建立灭菌过程），需要对微生物进行鉴定以确定产品微生物群落是否发生变化，因这些变化有可能影响到最终生物负载量的确定。
• 可以通过以下一个或多个特性完成微生物鉴定：染色特性、细胞形态、菌落形态、选择性培养的使用、生化特性、有足够的数据库提供基因序列数据。
• 通过微生物的鉴定，了解微生物的基本来源，为日常微生物的控制提供依据；及灭菌工艺的适合性提供依据（苏大卫环可为您提供微生物鉴定服务）。

总结

包装作为医疗器械生产过程中的重要环节，既要满足《医疗器械生产质量管理规范》的要求，也要满足对于包装本身的要求，才能保证最终产品的要求。无菌医疗器械作为一种特殊的医疗器械，因此，对其包装的要求也更为严格，本文主要介绍了无菌医疗器械初包装微生物负载的测定内容，为无菌屏障系统生产厂家对于灭菌过程的确认和再确认，制造过程控制的常规监测等提供指导。

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【参考资料】GB/T 19973.1-2015；《医疗器械生产质量管理规范附录无菌医疗器械》（国家食品药品监督管理总局公告（2015年第101号））；中国医疗器械信息，2018，17：24-25。

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